ほとんどの物語はアメリカの「タウンズビル市」という都市で繰り広げられ、パワーパフガールズはこの街の守護者として、銀行強盗の阻止、火災現場での救助、モンスターによる都市破壊の防止など、あらゆる任務を担っている。パワーパフガールズは犯罪者やモンスターに対しても容赦なく、ほとんどいつも彼らを徹底的に叩きのめした後、刑務所にぶち込むか警察に引き渡す。
パワーパフガールズには専用のホットラインがあり、市役所、リトルオーク幼稚園、ミス・キーニーの家には内線が設置されている。犯罪が発生した際は通常、市長がパワーパフガールズに連絡する。パワーパフガールズの主旨は「ヒーローは絶対的な善ではなく、悪党も絶対的な悪ではない…なぜなら誰もが良い本性と悪い本性の両方を持っており、どちらを選ぶかはその人次第だから」である。
エンドカットとエンドメッセージも本作の特徴で、各エピソードには独自のエンドカットとメッセージが用意されている。ほとんどのエンドカットはパワーパフガールズ三人組だが、エンドメッセージは通常「また一日が平和に過ぎた、パワーパフガールズの活躍に感謝!」と締めくくられる。ただし、これら二つが毎回同じとは限らず、そのエピソードの紛争解決に最も貢献した人物や事物が登場することも多く、必ずしも単独である必要もない(複数の場合もある)。
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